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技術支持

TRIzol法提取總RNA的實驗原理
發布時間:2022-03-23   點擊次數:99次

   說完磁珠法,今天帶大家看一下同樣常用的TRIzol法核酸提取,適用于人類、動物、植物、微生物的組織或培養細菌,樣品量從幾十毫克至幾克,常用于從組織和細胞中分離和純化RNA,拒絕蛋白和DNA污染。


實驗原理:

RNA質量的高低常常影響cDNA庫,RT-PCR和Northern Blot等分子生物學實驗的成敗。Trizol是一種新型總RNA抽提試劑,內含異硫氰酸胍等物質,能迅速破碎細胞,抑制細胞釋放出的核酸酶。TRIzol使樣品勻漿化,細胞裂解,溶解細胞內含物,同時因含有RNase抑制劑可保持RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液分為水相和有機相,RNA在水相中。取出水相用異丙醇沉淀可回收RNA;用乙醇沉淀中間層可回收DNA;用異丙醇沉淀有機相可回收蛋白質。


實驗步驟:

1、將組織在液氮中磨成粉末后,再以50-100mg組織加入1ml Trizol液研磨,注意樣品總體積不能超過所用Trizol體積的10%。 

2、研磨液室溫放置5分鐘,然后以每1mlTrizol液加入0.2ml的比例加入氯仿,蓋緊離心管,用手劇烈搖蕩離心管15秒。 

3、取上層水相于一新的離心管,按每mlTrizol液加0.5ml異丙醇的比例加入異丙醇,室溫放置10分鐘,12000g離心10分鐘。 

4、棄去上清液,按每ml Trizol液加入至少1ml的比例加入75%乙醇,渦旋混勻,4℃下7500g離心5分鐘。 

5、小心棄去上清液,然后室溫或真空干燥5-10分鐘,注意不要干燥過分,否則會降低RNA的溶解度。然后將RNA溶于水中,必要時可55℃-60℃水溶 10分鐘。RNA可進行mRNA分離,或貯存于70%乙醇并保存于-70℃。 

[注意] 1、整個操作要帶口罩及一次性手套,并盡可能在低溫下操作。 

          2、加氯仿前的勻漿液可在-70℃保存一個月以上,RNA沉淀在70%乙醇中可在4℃保存一周,-20℃保存一年。 

          3.由于樣本性質和數量的區別,在樣本取樣后處理方式均有不同,紅榮微再有專業的技術崗位為您保駕護航,為您解決試劑使用過程中出現的問題,保證實驗成果。


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品牌                          貨號                    名稱           規格

thermo Invitrogen  15596026         TRIzol™ 試劑    100mL


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