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在使用RNA提取試劑前有哪些注意事項呢
發布時間:2022-06-14   點擊次數:49次
  TRIzon是廣譜型總RNA提取試劑。實驗操作快速方便,顏色鮮明,便于分層。本試劑適用范圍廣泛,可以從動物組織、植物材料、各種微生物及培養細胞等樣品中提取總RNA。
 
  樣品在TRlzon中被充分裂解的同時能夠最大限度地保證RNA的完整性。在加入氯仿離心后,溶液會分成三層:上層無色水相、中間層和下層紅色有機相,RNA分布在上清層中。
 
  收集上清層后,經異丙醇沉淀便可以回收得到總RNA。提取的總RNA完整性好,無蛋白和DNA污染,可用于各種分子生物學常規實驗,如RT-PCR.Real-time RT-PCR、Northern Blot、Dot Blot、體外翻譯等。
 
  下面讓我們來了解一下使用RNA提取試劑前的準備事項吧:
 
  1.預防RNase污染,應注意以下幾方面:
 
  1)使用無RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。
 
  2)玻璃器皿應在使用前于180℃高溫下干烤4小時,塑料器皿可在0.5MNaOH中浸泡10分鐘,用水徹底沖洗后高壓滅菌。3)配制溶液應使用無RNase的水。
 
  4)操作人員戴一次性口罩和手套,實驗過程中要勘換手套。2.提取的樣品避免反復凍融,否則影響RNA提取得率和質量。
 
  3,本品中含有苯酚,具有毒性和腐蝕性。如果吸入體內、接觸皮膚、吞食等會導致中毒、灼傷以及其他身體傷害。使用本制品時應穿戴防護物品,如手套、眼罩、面罩等。如果不小心接觸到眼睛,應立即用大量的水沖洗并前往醫院治療。
 
  4.樣品用TRIzon勻漿后,如不即刻加入氯仿,置于-70°℃下可放置一個月以上。
 
  5,保存在75%乙醇中的RNA沉淀,2-8C可以保存一周,-20C條件下可以保存1年。RNA半衰期比較短,容易降解,建議提取后盡快進行后續實驗,如反轉錄成cDNA,Northern Blot等。
 
  6.若下游實驗對DNA非常敏感,建議用不含RNase的DNasel(貨號:CW2090A)對RNA進行處理。

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